提rna预备做microarray. 这两天练习测rna的uv光谱,结果很多都达不到1.8,还有个别很希奇的结果.想请教一下大家改进的方法.

我提了两组rna, 各测了7次,A260和A260/A280的比值结果如下:

第一组:

0.17/1.84;
0.629/1.27
0.131/2.13
0.2066/1.65
0.140/2.05
0.157/1.79
0.167/1.79

第二组:

0.589/1.87
0.870/1.68
0.843/1.66
0.775/1.85
0.884/1.76
2.200/1.21
0.872/1.91

我自己想了一下:整体偏低可能是因为我是用的纯水溶的rna,而不是7。5 ph值的溶液。较低的ph值会导致较低的光谱读数。不知道这个原因能不能算。

另外两组里面a260/a280非凡小的两个的rna，rna浓度非凡大。我估计是我溶解的时候不匀，没充分溶解。但是我不确定溶解和光谱值的关系。想请教假如rna没有溶就测uv会对结果产生怎么样的影响。

还想请教正常应该用多少水溶解rna。我现在rna从组织里提，量比较大，别人告诉我都用20ug水，但是像上面两组里面浓度差那么大，我想第二组是否可以多用一些水溶解？

过两天要用nanodrop再测，希望测之前能把这些问题先解决掉。感谢大家指导！

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我以前都用30ug水溶的，而且水溶的偏低，你可以用TE buffer试下，比值会上去很多的！

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我以前做时，都是用50uL水溶解。
部分数据如下：
Sample ID---Net Abs 260.0nm---Net Abs 280.0nm---260.0/280.0---Dil.Fact.---Conc.µg/mL
1 1.5045 0.8412 1.7884 50.000 3009.0366
2 1.2137 0.6767 1.7936 50.000 2427.4148
3 1.4304 0.8292 1.7250 50.000 2860.8333
4 1.0516 0.5258 1.7972 50.000 2103.2539
5 1.5698 0.8716 1.8011 50.000 3139.5701
6 1.4752 0.8152 1.8096 50.000 2950.4578
7 1.1837 0.6701 1.7666 50.000 2367.4885
8 1.4056 0.7994 1.7583 50.000 2811.1858
9 1.3746 0.7552 1.8201 50.000 2749.1172
10 1.5252 0.8511 1.7920 50.000 3050.4058

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tilling wrote:
我以前做时，都是用50uL水溶解。
部分数据如下：
Sample ID---Net Abs 260.0nm---Net Abs 280.0nm---260.0/280.0---Dil.Fact.---Conc.µg/mL
1 1.5045 0.8412 1.7884 50.000 3009.0366
2 1.2137 0.6767 1.7936 50.000 2427.4148
3 1.4304 0.8292 1.7250 50.000 2860.8333
4 1.0516 0.5258 1.7972 50.000 2103.2539
5 1.5698 0.8716 1.8011 50.000 3139.5701
6 1.4752 0.8152 1.8096 50.000 2950.4578
7 1.1837 0.6701 1.7666 50.000 2367.4885
8 1.4056 0.7994 1.7583 50.000 2811.1858
9 1.3746 0.7552 1.8201 50.000 2749.1172
10 1.5252 0.8511 1.7920 50.000 3050.4058

谢谢二位指点!

请问你这个是提的什么材料? 浓度比我的高的多.

我正常测到A260最多也就0.7左右,我测的是小肠提取的癌组织