PCR产物酶切后PAGE电泳
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1.基本过程:PCR扩增出290bp的产物,酶切成35-91bp六个小片段,不同片段的组合用于基因分型;PCR产物经多次琼脂糖电泳及PAGE电泳证实特异性较好,测序结果提示为目标片段;
2.PAGE胶电泳的条件:
10%PAGE;
170mm*170mm*1mm;
50V*40Min预电泳;
上样量12uL;
150V*240Min电泳
EB染色15Min
3.问题(见图)
1)条带较宽,拖尾明显,难以作出令人信服的判读,请教各站友有什么办法可以有效减少拖带?已经搜索精华区,开始时高电压短时间电泳后如常电泳能缩窄条带,结果稍有改善但仍未理想。
2)样本条带呈U型,请问原因是什么,有什么方法避免?
先谢谢大家!
你减少上样量试一试,
建议用银染,效果更好。
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