准备提取RNA
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预备提取组织RNA,买了DEPC,在浸泡枪头和EP管。请问泡完要不要再用水冲?还是直接装到枪头盒中高压灭菌?谢谢大家/
直接装到枪头盒中高压灭菌就可以了。
不能用水冲,那样就白用DEPC水泡了。
以前做过的-----RNA(组织或细胞的)提取步骤:
1. 向研钵(含研棒)内加入一些乙醇(约每个3mL),用火烧一下,冷至室温,再用液氮预冷;
2. 取出组织迅速在液氮中研磨;
3. 研磨好的组织粉末用预冷的药勺迅速转入已经加好变性液(动物RNAout——***工程有限公司)(约0.5mL)的无RNase的EP管中;
4. 补加变性液至1mL(1mL/0.1g组织),充分混匀;
5. 加入氯仿200µl,剧烈振荡混匀,4℃,15000g,5min,上清转至洁净的EP管中;
6. 加入等体积冰冻异丙醇,剧烈振荡混匀,4℃,15000g,15min,弃上清;
7. 加入冰冻75%乙醇1mL,剧烈振荡混匀,使沉淀悬浮;4℃,15000g,5min,弃上清;(此步可以重复一次)
8. 5000rpm,5s,用去酶枪头吸掉多余的上清,冰盒上敞盖凉干;
9. 加入DEPC处理的H2O 50µl,剧烈振荡使之溶解;
10. 取2µl 测浓度,其余-70℃保存;
注:需带帽子和手套,口罩。
用的动物RNAout——天净沙系列,是***工程有限公司的
靠,怎么***工程有限公司就显示不了啊
用拼音吧,是tian ze ji yin gong cheng you xian gong si 。
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