红色荧光蛋白问题
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求助:我将目的基因从与eGFP-N1融合的蛋白上切下来,连入pDsRED中,酶切鉴定正确后,转染Hela细胞。但是,细胞能看到绿光,却不能看到红光,我又看了下没转的细胞,没转的是没有荧光的。请问是怎么回事呢?
你的实验结果很正常啊,eGFP本来就是绿色荧光基因,怎么会有红光。
不阿,我后来是把目的基因连到RED上的阿,应该发红光才是嘛
我怀疑可能是你在获得目的基因片段的同时有eGFP载体的污染。由于DsRed和EGFP序列非常相似,所以酶切鉴定阳性。建议重新进行酶切连接实验。
当然你也需要先验证一下,DsRed载体中是否存在eGFP污染。
我也怀疑过是污染了。后来用NcoI鉴定的,它在RED上多个酶切位点嘛。
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