关于siRNA菜鸟求教

马上要开始做课题了。
老板让我做的是一个和PPAR gamma蛋白相关的课题,是师姐留下来的。
他让我通过siRNA把PPAR gamma蛋白给干扰掉,看看肿瘤细胞的细胞周期等情况有没有改变。
我找公司合成了siRNA。公司回复如下:
合作愉快。我帮你设计的序列如下:
PPARG-105(文献发表)
sense : GCCCUUCACUACUGUUGACTT
antisense: GUCAACAGUAGUGAAGGGCTT
以下我们设计:
PPARG-129
sense : GCAUUUCUACUCCACAUUATT
antisense: UAAUGUGGAGUAGAAAUGCTG
我想问一下:
1.这个sense就是对照吧,转染到细胞中,理论上细胞中的PPAR gamma蛋白应该表达量是不变的,而这个antisense序列转染到细胞中,靶蛋白的表达量就会减少的吧?
2.能不能用脂质体2000来转啊。就是师姐以前做报告基因实验留下来的脂质体2000来转?
感谢!


楼主,你的理解是错误的,sense和antisense分别是siRNA的两条链,这两条链退火,形成RNA双链,转入细胞后发挥RNAi的作用。而你所提到的阴性对照通常分为两种,一:使用通用的阴性对照序列,网上可以查到。二:使用和靶基因siRNA核苷酸组成,但顺序打乱的siRNA。最好使用通用序列。可以用脂质体2000进行转染,不过,不同的细胞,需要使用不同的转染试剂,你可以查阅相关资料,看看别人已经成功的实验。如没有资料可以参考,可以使用一些洋相对照优化转染条件。
感谢感谢!ls太伟大了!!
支持!!!!!!!!!

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