有关T载体的困惑
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看了很多有关真核表达载体构建的文献
大多是先把PCR产物连接在T载体上扩增，再连接到真核表达载体上
为什么不直接连到真核表达载体上呢？
请各位帮忙解答一下 多谢
PCR产物连接到T载体上叫做TA连接，即利用PCR产物3‘末端自动加A，使得PCR产物具有粘性的突出3‘ A 末端；同时T载体自身为线性，在其3‘末端具有突出的T粘性末端，上述2者末端正好可以互补连接。而真核表达载体本身是环状DNA，不具备3‘突出的T粘性末端，固然不能与PCR产物连接。但连接到T载体上的PCR产物两端T载体具有多个可供选者的酶切位点，同时真核表达载体上也具有多克隆位点，选择上述两者共有合适的酶切位点进行酶切、回收、连接达到最终目的。
谢谢大虾的解答 我还有个疑问： PCR产物是和一个T载体连接成环 还是两端分别连接一个T载体成线形结构 或是有其他的情况呢
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